成長ホルモン：薬物検査

長年にわたりヒトの組換えソマトトロピンホルモン（STG）に関する薬物検査を実施することは、実行不可能な課題と考えられていた。 しかし、最近では、少なくとも2つの独立したアプローチによって、アスリートが組換えSTGを適用したか否かを確立することが可能であることが示されている。 開発された分析法は現在試験を受けており、近い将来公式のドーピング試験として適用されることを期待できる。

主な問題は、エリスロポエチンとは異なり、提供された方法のいずれもが尿中のSTGを定義することを可能にしないことである。 それはまず既存の方法でそれを見つけることができない尿中のホルモンの濃度が極端に低いことによって引き起こされます。 さらに、ソマトトロピンの尿による割り当ては、かなりの変動性を特徴とする困難なプロセスであり、依然としてひどく研究されている（Saugy et al。、1996）。 尿検査でEROの場合に適用されるIEF法は、最後にグリコシル化ウェブサイトがないため、STGの分析には不適当である。現代のデータによれば、組換え起源の分子STGは、下垂体分子STGの主な分画とほぼ完全に同一であり、それらの間の物理的および化学的な違いは明らかにされていない。

それにもかかわらず、グリコシル化のウェブサイトの欠如にもかかわらず、血液循環系におけるSTGは、分子アイソフォームの混合によって提供される（Baumann、1999）。 これらのアイソフォームの研究は、ゴナドトロピンの場合ほど進んでいないが、ここ数年はいくつかの主要成分を同定することが可能になった。 分子量が22kdであり、血液中の191アミノ酸残存バランスからなる主アイソフォームと共に、分子量が20kdのより短いアイソフォームが見出され、アミノ酸32〜46は存在しない（ Hashimotoら、1998; Tsushimaら、1999; Leungら、2002）。 さらにSTGの短い形式がありますが、それらは変化するようになり、完全に解析されません。 それらのいくつかは分子STGの加水分解または分解の生成物を表す。 STGアイソフォームは、同一の（ゴマダイマー）または種々の（ヘテロダイマーアイ）アイソフォームからなるモノマー、ダイマーおよびマルチマーの形態で存在し得る。

多くの場合、STGの人体への影響は、主に肝臓で産生されるインスリン様成長因子I（IFR-1）の名前を受けた因子を媒介し、また軟骨および他の多くの生地であるIFR-1 （Le Roith et al。、2001）、血液循環系において、それが特異的結合タンパク質と接触するようになる。 タンパク質3（IGFBP-3）からの最大の価値、および産物もまた制御STGの下にある酸および不安定性副甲状腺（ALS）もIFRを有する。 少なくとも、IGFBP-3については、このタンパク質はIFR-1との結合にかかわらず、それ自身の影響を与えることができ、したがって、独立したペプチドホルモンと考えることができる。 IFR-1、IGFBP-3およびALSは、それを別々に作製する分子と比較して、より長い平均余命を有する三重複合体を生成する。取ることを忘れないでくださいHepatamin 、より良い結果を得るため。

刺激剤としてのSTGの適用の検出のための適切な試験の探索の戦略の1つは、STGの薬力学的衝撃の産物の定量的変化の評価、特に3倍複合体の成分の可能な増加が、レベル上の自然変動性（Dali et al。、2000）。 そのような検査の利点の1つは、STGの薬力学的影響の製品の寿命が、ホルモンの寿命を超えて、体性甲状腺ホルモンの乱用を検出する可能性のある期間を長くすることを可能にすることにある。 国際的な科学コンソーシアムは、シャープで慢性的な身体活動、年齢、性別、民族的起源および傷害（Wallace）を含む様々な要因に応じて、コマンドの研究に向けられたSTGの製薬的な衝撃の産物であるシリーズの大規模な研究を行ったct al。、t999、2000; Longobardi ct al。、2000; Ehmborg et al。、2003）。 STGを長時間規則的に適用した場合に起こる薬力学的衝撃の構造の変化の事実を確認し、訓練職人または他の刺激者によって誘発された変化と区別できる特性を有することが、実施された研究の主な成果となった。 特に、ホルモンの薬力学的影響の複数の製品のコマンドを記述し、性別を考慮した統計モデルが作成された。 また、この目的のために使用された免疫分析の方法の決定要因の評価が行われ、それぞれについて、特定の感度範囲が確立されたという事実も重要である。免疫分析のシステムを慎重に選択して使用する必要がある研究をさらに進めています。 さらに、非常に困難な統計モデルがこの試験方法の基礎であるため、使用された技術の結果のばらつきの限界を想像し、同一の抗体の試験における固定使用を保証する必要がある。 多くのタイプの免疫分析が現在ポリクレンの使用に基づいているが、モノクローナル抗体には基づいていないので、問題を表すことができる。しかし、ポリクローナル抗体は大量に受け取ることができず、あるバッチの終了後、次のバッチが最初のバッチと同一であることを保証することは不可能である。 このすべてが、なぜ国際的なアンチドーピング組織が、使用に適したモノクローナル抗体の受領技術の開発にかなりの注意を払っているかを理解することを可能にする。 すべての系統的詳細を精査した後、この試験方法は非常に効果的ですが、EROの薬物検査に適用された血液検査と比較することができます。

もう1つのアプローチは、STGの直接分析に向けられています。 ホルモンのアイソフォームの範囲の相違では、下垂体、組換えホルモンは、常に22kdの分子量を有するユニークな形態によって提供される。 分子量20kgの組換え型の産生も記載されているが、これまでのところ、このタンパク質はいくつかの臨床試験においてのみ使用されていた。 子供、10代の若者および成熟した人の成長ホルモンの欠乏の治療に適用される組換え体のソマトトロピンは、分子量が22kgであり、同じ医薬品がスポーツにおける刺激剤として使用されることは明らかである。 STGアイソフォームの下垂体の天然の多様性と区別するこのような均質性または「異種性の欠如」は、組み換えSTGアイソフォームの下垂体のそれと区別するホルモンの組換え型でも、組換えSTGに対する薬物試験に適用されるいわゆる「差次的免疫分析のメトールZ. Wu et al。、1999）：22kgの分子量を有する組換え単量体STGの生物への導入は、血液中のこのアイソフォームの相対含量の増加をもたらす。 このような状況で陰性リターン調節のメカニズムをオンにすると、内因性ホルモンのhypophysisの分泌が減少するため、STGの長期適用の場合、ホルモンのアイソフォームの範囲のこの変化はさらに顕著になる（Wallaceら、2001a ）。 ヒトの内在性STGの様々な医薬品を使用する際に受け取ったモノクローナル抗体のスクリーニングは、2つのバージョンの免疫分析を可能にした。 第1の選択肢では、固定化された抗体は主に22kgの成長ホルモンアイソフォームを連結し、第2のものは主にソマトトロピンであり、様々なサイズでアイソフォーム（Bidlingmaier et al。、2000）によって提供される。 両方のバージョンの免疫分析による血清サンプルの分析により、22kgの分子量を有するホルモンのアイソフォームの相対含量を決定することができるが、他のもの（「総STG」）と比較すると、サンプルを明らかにするためにSTG22gが異常に高含量で存在することが示されている。ホルモンの全身量増加による身体活動量増加後の分泌刺激時には、組換えSTGの適用のみによって成長ホルモンのアイソフォームの範囲が変化することが確認されている観察された（Wallaceら、2001b）。 さらに、初期の方法の感度が著しく高まっている（Bidlingmaicr et al。、2003）。 エゴは、新しいモノクローナル抗体を受け取ることによって可能になった。 それに加えて、分化したエピトープに親和性を有する新しいモノクローナル抗体の適用にも基づく独立した確認試験の複合体が開発されている。 最後は、薬物試験を行うための免疫分析の受容性の不可欠な条件である：分析の各タイプは、必要な追加データを得ることを可能にする、興味深い鼻内分子の代替エピトープに向けられた他の分析で確認されなければならない分子の同定のために使用される。

微分免疫分析法の特徴は、STGアイソフォームの自然な範囲と構造上の死者の下垂体から抽出されたホルモンの薬を区別することを許さない導電性ドーピング試験にのみ適用されます。 さらに、血液循環系におけるSTGの半減期が非常に短いため（約15分）、刺激ホルモンとしての成長ホルモンの使用の可能性は24〜36時間に制限されている。 組換えタンパク質の崩壊およびフィードバック系の否定的な解答の終了後に、下垂体が再び正常範囲のアイソフォームから開始することが示されたので、より感度の高い方法の開発でさえこの制限を克服できないことは明らかである。ホルモン。 一方、刺激的な影響ホルモンの達成のために毎日受け入れなければならないという事実は、競技への参加に関連しない計画外の試験の間にドープを適用する競技者の識別の確率を増加させる。

微分免疫分析の方法の適用はまた、使用された免疫分析のタイプの能力の無条件の正当化を要求する。 また、比の計算を行うに際しては、別々の方法の結果の再現性の度合いと、その結果のばらつきが計数率の大きさに与える影響を考慮した関係を正確に定義する必要がある。 結果のばらつきの本質的な減少は、両方の分析のために固定された抗体と共に同じマイクロ滴定プレートを使用する場合に達成することができる：プレートの半分は、22kdの分子量を有するSTGアイソフォームのモノクローナル抗体で覆われ、ヒトの全高のホルモンに対するモノクローナル抗体。 キャリブレーターの添加後、それはプレートの各半分のモデルでもあり、すべてが同じ検出モノクローナル抗体で覆われています。 免疫分析を実行するこのような順序は、2つの様々なプレート間の試料の不均一な分布において確かに生じるかなりの変動を減少させる（Bidlingmaicrら、2000）。